Choosing the appropriate enzyme is a key factor in molecular diagnosis
选择适合的酶是分子诊断的关键因素。对于PCR反应来说，DNA聚合酶是核心酶，不同类型的聚合酶具有不同的特性和性能，包括热稳定性、特异性、持续合成能力、保真度、扩增片段长度和延伸速度等。
选择合适的酶
最常用的DNA聚合酶之一是Taq DNA聚合酶。Taq DNA聚合酶来源于嗜热细菌水生栖热菌，具有热稳定性。通过蛋白质工程的方法，可以对Taq DNA聚合酶进行改造，提高其稳定性、特异性和扩增能力。其中，热启动修饰的Taq聚合酶是应用最广泛的一种。热启动修饰技术可以防止非特异性扩增和引物二聚体的形成，提高PCR反应的特异性和灵敏度。
另一种常用的DNA聚合酶是高保真聚合酶。普通Taq DNA聚合酶缺乏外切核酸酶活性，因此保真性较低。而高保真聚合酶具有外切核酸酶活性，可以纠正PCR反应中的错配，并提高复制的准确性和保真性。市场上常见的高保真聚合酶有Pfu和KOD两种，它们经过基因工程改造后可以实现更高效率、更高的保真性和更快的延伸率。
现代市场趋势是使用融合酶，将高保真聚合酶与双链或单链DNA融合，以提高持续合成能力和扩增效率。例如，Phusion高保真酶就是将Pfu DNA聚合酶与Sso7d双链DNA融合而成，具有更高的保真性和更快的扩增速度。
因此，在分子诊断中选择适合的酶非常重要，可以根据实验要求和需求来选择合适的聚合酶，以提高诊断的精确性和准确性。